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非洲猪瘟病毒核酸检测实操整体方案推荐（1）
◆ 非洲猪瘟ASF的由来：非洲猪瘟(African suwinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒感染家猪和野猪后产生的一种烈性传染病。此次疫情来势迅猛，从2018年8月首次传入我国后便飞速席卷养猪业，带来了不可预估的经济损失。非洲瘟病毒是一种具有囊膜结构的双链DNA病毒，感染家猪和野猪后引起高热出血和死亡。目前PCR方法被指定用于非洲猪瘟病毒的检测，其具有高灵敏度、高特异性、快速的特点。
在此，通过实际的案例，与大家分享合作公司组合的高效靠谱的非洲猪瘟病毒检测方案。
◆ 非洲猪瘟感染组织样本的前处理：
非洲猪瘟的易感对象是家猪、野猪，通常采集的样本为血浆和组织。对于组织样本来说，在核酸提取前需要进行充分研磨破碎，保证核酸充分释放，提取核酸后用于后续检测，若无充分研磨可能会造成核酸检测的假阴性结果。使用DHFSTPRP系列全自动样品快速研磨机，升级了更强的动力，改进了研磨方式，样本在全封闭状态下裂解避免样品间的交叉污染以及外界污染，在保证样本安全的前提下使样品研磨更充分、彻底，研磨效果稳定；有多种规格适配器、研磨珠和研磨罐，可同时快速处理24-64个组织样本，液晶显示屏可储存10条数据。更有DHFSTPRP-II系列液氮冷冻研磨机，真正的全自动冷冻研磨，低温达到-196℃，可轻松处理热敏感性样本及难研磨样本。
◆ 非洲猪瘟感染组织样本核酸提取：
TGuide S32自动核酸提取仪采用最新磁棒吸附转移核酸纯化方式，利用96深孔反应板，搭配不同种类的磁珠法核酸提取试剂，同时操作1-32个样本，从血液、细胞、组织、病毒等多种样本中自动分离提取纯化核酸。仪器通过特制的磁棒高效吸附、转移和释放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液体处理体积：20-1000μl，多档可调振动速度，溶液体积自适应振动幅度，振动幅度根据溶液体积自动调整保证裂解效果；配备交叉污染控制系统与紫外灭菌�？�，有效避免孔间及板间交叉污染；同时优化加热槽位设计，核酸回收体积更为准确。
◆ 高敏及高特异性的荧光定量PCR检测：仪器通过特制的磁棒高效吸附、转移和释放磁珠，磁珠回收效率：≥98%，核酸得率更高；液体处理体积：20-1000μl，多档可调振动速度，溶液体积自适应振动幅度，振动幅度根据溶液体积自动调整保证裂解效果；配备交叉污染控制系统与紫外灭菌�？椋行П苊饪准浼鞍寮浣徊嫖廴荆煌庇呕尤炔畚簧杓�，核酸回收体积更为准确。终点法PCR和实时荧光定量PCR均可以检测PCR产物的量，从而推断初始模板的含量。由于凝胶成像方法本身灵敏度的局限，实时荧光定量PCR荧光染料的加入，使仪器对于整个PCR反应进行实时监控，准确性更高。
宁波中道非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒（B盒）是一款基于荧光探针的荧光定量检测试剂盒，主要用于检测疑似感染猪抗凝血及临床病料中的非洲猪瘟病毒（ASFV，African Swine Fever Virus）核酸，适用于非洲猪瘟病毒的检测、诊断和流行病学调查。
试剂盒-20°进行保存，有限期为12个月，盒内提供阴性及阳性对照，对于整个实验进行质量监控。在第一批非洲猪瘟现场快速检测试剂评价结果中，郑州中道非洲猪瘟荧光定量PCR快速检测试剂盒在诊断敏感性和诊断特异性上均表现优异。
◆ 荧光定量检测仪器：罗氏全能荧光定量PCR仪：
罗氏Light Cycler 96荧光定量PCR仪是全波长，高光强的PCR仪，高性价比，超长使用寿命，所有样本同时检测且高重复性，采用业内独有的光纤导光，避免光信号的损失；运用LightCycler 480上受好评的银质温控模块，导热性快速均一，孔间温控差异±0.2°，升温速度4.4°/s，降温速度2.2°/s，96孔检测≤40min（35 Cyclers），较许多机型可节省一半的时间。Light Cycler 96可灵敏检测单拷贝基因，拷贝数差异≤1.5倍，置信度≥99.8%，且无需无需ROX等被动染料校正，方便快捷性能稳定。
◆ 小体系上样操作工具：eppendorf移液器：
小贴士：
实时荧光定量PCR通常为小体系实验，对于微量样本来说特别是1-10ul上样操作会出险移液吹打不净现象，精准移液是准确结果的重要要素，因此推荐使用Eppendorf Reference2系列移液器搭配原装进口吸头进行移液操作和联系昆腾战队工程师做移液操作专场讲座，为结果的准确性保驾护航。
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